CRISPR-Cas9基因编辑技术的出现为哺乳动物模型构建提供了简便、快速的方法,也为基因疾病的治疗提供新思路、新方法。 豪利777科技继质粒DNA后全新推出CRISPR RNP介导的细胞基因编辑服务:平台依托先进的技术和经验丰富的科研团队,为您打造从方案设计、sgRNA设计及化学合成、高活性重组Cas9蛋白,RNP复合物组装到敲除细胞系构建的全流程服务。

服务流程

服务优势:方案设计-合成-细胞系构建一体化服务

  1. 设计精准:专有设计算法,全模式物种CRISPR sgRNA设计
  2. 合成平台:化学合成修饰化的sgRNA更稳定,纯度>99%
  3. 重组Cas9蛋白:活性检测,纯度>99%
  4. 周期:周期短,最快至2周交付
  5. 定制化服务:根据客户需求制定个性化方案,定期反馈项目进度,交付详细的CoA文件。

服务详情

服务项目 交付内容 交付周期
方案设计 专业的分析报告
设计序列
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合成与组装 化学合成修饰化的sgRNA
高活性、高纯度的Cas9蛋白
RNP复合物组装
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敲除细胞系构建 多克隆细胞群或单克隆细胞株
提供细胞基因型复检、扩增及冻存
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验证 DNA水平检测
蛋白水平检测
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豪利777科技案例
1、利用RNP下的双sgRNA编辑法,实现基因DNA水平片段敲除
案例:对X细胞的A基因进行Exon1-13的片段敲除(KO)
(1)在需求敲除片段两端分别设计1条高靶向的sgRNA序列,如下图:

(2)将gRNA-A1、gRNA-A2进行化学修饰合成后分别与Cas9蛋白组装成RNP,转染至X细胞进行A基因片段序列敲除;

(3)敲除结果检测如下:
DNA水平-Sanger测序显示,A基因序列已被敲除,结果如下:

细胞表型检测如下图:A为正常细胞,B为A基因敲除后的突变细胞形态,表明A基因被敲除。

2、RNP敲除效率远超传统质粒法
案例:以AAVS1位点敲除为例,比较质粒(DNA)与RNP的敲除效率
(1)将AAVS1-sgRNA1序列构建带有Cas9的载体中,转染细胞后提取基因组DNA,以基因组DNA为样本进行Sanger测序并结合Synthego ICE分析软件检测,结果显示敲除率为14%;

(2)将AAVS1-sgRNA1 RNP复合物转染细胞后进行如(1)所述检测,结果显示敲除效率为69%;

(3)敲除效率比较(如下图),结果显示RNP敲除效率是质粒法的4-5倍,显著高于质粒法。

服务订购与咨询
您可以通过以下任意方式下单或咨询,工作时间我们保证在1小时内给您反馈:

  1. Email:请将您的需求发送到support@synbio-tech.com
  2. 电话订购:工作日您可以拨打免费热线4000-973-630(按1);休息日您可直接拨打18262686586联系我们
  3. 在线咨询:您有任何技术问题均可与我们进行网页在线互动